热休克蛋白70在宫颈癌中的表达及意义

 

本研究采用免疫组化SP法检测组织中HSP70的表达,从而探讨其与的关系。

 

　　1 对象与方法

 

　　1.1研究对象

 

　　选择2008年1月～2009年1月我院收治的47例宫颈癌患者,均接受手术治疗,留取手术切除标本。术前均未进行放、化疗。同时收集10例正常宫颈组织作为对照组。

 

　　1.2试剂

 

　　兔抗人HSP70多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。

 

　　1.3免疫组化SP法

 

　　切片经脱蜡、梯度酒精脱水后,自来水冲洗,蒸馏水冲洗3 min。3%甲醇-H2O2中室温孵育20 min,蒸馏水冲洗冲洗3 min,PBS冲洗5 min×2次。HSP70采用高压热修复。室温冷却,放入PBS内冲洗5 min×2次,用山羊血清封闭,37℃温箱内孵育45 min。滴加兔抗人HSP70抗体(一抗)按1∶100稀释,对照组用PBS,4℃过夜。PBS冲洗5 min×3次,滴加二抗工作液,37℃温箱内孵育30 min,PBS冲洗5 min×3次。滴加三抗工作液,37℃温箱内孵育30 min,PBS冲洗5 min×3次,DAB显色。苏木素复染,常规梯度酒精脱水,中性树胶封片,显微镜下观察。以已知阳性切片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。

 

　　1.4结果判定

 

　　阳性染色为胞质和(或)胞核中出现棕黄色颗粒。每张切片至少观察10个高倍视野,计数阳性细胞与细胞的百分比:<5%为(-),5%～25%为( ),26%～50%为( ),>50%为( ),( )～( )为阳性。

 

　　1.5统计学方法

 

　　数据用SPSS 10.0软件进行分析,经确切概率法检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

 

　　2 结果

 

　　2.1 HSP70的表达

 

　　47例宫颈癌中HSP70阳性表达率为74.5%(35/47),10例正常宫颈组织中HSP70阳性表达率为20.0%(2/10),经确切概率法检验,差异有高度统计学意义(P<0.01)。

 

　　2.2 HSP70与组织分级的关系

 

　　47例宫颈癌包括高分化10例,中分化21例,低分化16例,其阳性率见表1。结果显示,宫颈癌分化程度越低,HSP70的表达越强。

 

　　2.3 HSP70与宫颈癌组织学类型的关系

 

　　宫颈癌组织分型及HSP70阳性率见表2。经统计学分析,差异无统计学意义(P>0.05)。

 

　　3讨论

 

　　HSP广泛存在于原核和真核生物,在生理条件下,HSP呈基础表达,调控细胞的增殖与分化、胚胎的生长发育、激素的功能效应等。HSP能调节蛋白质的折叠、传递与降解,在维持组织细胞的自身稳定和环境适应性方面也有重要作用。在有害因素如热、冷、缺血、低氧、有机毒物、重金属、微生物、组织创伤、基因损伤等的刺激下,均可诱导HSP产生,并保护细胞对抗热休克和其他导致大量蛋白质损伤、变性的有害刺激,防止应激所致的蛋白质损伤,进而启动内源性保护机制,发挥抗损伤的应激保护效应。大量研究显示,表达HSP的细胞对热休克、射线(如γ射线)、TNF-α等多种刺激诱导的凋亡有抑制作用。肿瘤细胞HSP70表达水平一般较高,赵霞等用HSP70反义寡聚核苷酸阻断Molt-4等肿瘤细胞的内源性HSP70表达,结果发现,HSP70反义寡聚核苷酸的使用可以诱导肿瘤细胞凋亡,同时抑制肿瘤细胞增殖,提示HSP70的表达有助于肿瘤细胞的生存和增殖。

 

　　本研究发现,宫颈癌组织HSP70的阳性表达率为74.5%,正常宫颈组织HSP70的阳性表达率为20.0%,与郭云鸿等的报道一致。本研究结果显示,HSP70的表达与宫颈癌细胞的分化程度和组织类型没有明显的相关性,但可以看出,高、中、低分化各自的阳性率差别很大,细胞分化程度越低,HSP70的表达越强,推测HSP70的表达可能与患者的预后有关,HSP70表达越强,患者预后越差。由此可以推断,HSP70的表达可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关,检测其表达水平有望作为估计患者预后的指标之一。