膀胱癌患者尿中可溶性Fas和可溶性FasL表达水平的意义
【摘要】 目的 探讨可溶性Fas（sFas）和可溶性FasL(sFasL)在病人尿中的表达及其临床意义。方法 应用双抗体夹心ELISA法检测43例病人术前、术后和12例正常人尿中sFas和sFasL的表达水平。结果 膀胱癌病人尿sFas和sFasL水平均高于正常对照组，sFas与临床分期、病理分级正相关，sFasL仅与临床分期正相关。肿瘤切除术后sFas和sFasL水平均降低，而且复发者术后sFas水平显著高于无复发者。结论 sFas和sFasL参与膀胱癌的发生、发展，在一定程度上可以反映膀胱癌生物学行为。
【关键词】 膀胱肿瘤 可溶性Fas 可溶性FasL 细胞凋亡
近年来，随着细胞凋亡调控机制研究的深入，肿瘤免疫逃避机制在恶性肿瘤发生发展过程中的重要作用为人们所接受，其中Fas和FasL系统的作用更受重视［1,2］。可溶性Fas(sFas)和可溶性FasL(sFasL)是Fas/FasL系统另外一种存在形式，通过与FasL竞争结合而抑制Fas途径介导的细胞凋亡，但目前对两者在恶性肿瘤发病中作用了解较少［3］。本组采用双抗体夹心ELISA方法检测膀胱癌患者尿中sFas和sFasL表达水平并探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 膀胱癌患者尿液标本
43例膀胱移行细胞癌， 年龄26～73岁， 男34例、 女9例。31例行开放性肿瘤切除， 5例行膀胱部分切除， 3例行全膀胱切除， 4例行经尿道膀胱肿瘤电切。按WHO分级标准：Ⅰ级14例， Ⅱ级17例， Ⅲ级12例； 按UICC分期：T0～1期29例、 T2～4期14例。均获随访1年以上， 复发9例。12例健康者（男9例、女3例）作为正常对照， 年龄18～61岁。
1.2 实验方法
分别留取术前和术后1周病人的晨尿5ml，2000r/min离心10分钟后分装，放入-70℃冰箱保存。成批采用双抗体夹心ELISA法测定尿液中sFas和sFasL水平，试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供（美国Genzyme公司产品分装）。实验操作严格按照说明书要求进行。
1.3 统计方法
各组数据用均数lusm标准差表示，采用方差分析、直线相关分析和t检验。
2 结果
正常对照组尿sFas水平为43.5lusm6.2pg/ml，膀胱癌病人尿sFas水平明显升高为127.8lusm16.5pg/ml，P<0.001。膀胱癌病人术后一周尿sFas水平明显低于术前(P<0.001)。T0～1期膀胱癌尿sFas水平显著低于T2～4期病人(P<0.001)；Ⅰ级+Ⅱ级与Ⅲ级相比较，后者显著高于前两者（P<0.01）；但复发者与无复发者术前sFas水平相比差异无显著性（P>0.05），而术后1周复发者sFas水平显著高于无复发者(P<0.001)。sFas水平与膀胱癌病人的年龄、性别、肿瘤大小和数目之间相关无显著性意义（P>0.05），见表1。 表1 sFas和sFasL在膀胱癌术前、术后中表达水平及与病理特征关系 正常对照组尿sFasL水平为20.4lusm3.3pg/ml，显著低于膀胱癌病人的74.6lusm10.8pg/ml,P<0.001。膀胱癌病人术后1周尿sFasL水平显著低于术前（P<0.001）。T0～1期sFasL水平显著低于T2～4期（P<0.001）；但sFasL水平与肿瘤病理分级、复发、年龄、性别、肿瘤大小和数目之间相关无显著性意义（P>0.05）,见表1。
膀胱癌病人术前及术后1周尿sFas和sFasL水平之间相关性均分别无显著性意义（P>0.05）。膀胱癌术前sFas/sFasL比率为1.93lusm0.56，术后1周为2.11lusm0.64，P>0.05。
3 讨论
细胞凋亡在恶性肿瘤的发病机制乃至预防、治疗中的作用日益受到重视。Fas是一种属于肿瘤坏死因子受体超家族的Ⅰ型膜蛋白，分子量为45KD；FasL则属于肿瘤坏死因子超家族的Ⅱ型膜蛋白，分子量为40KD，两者参与杀伤性T淋巴细胞和自然杀伤细胞介导的细胞毒作用，在介导细胞凋亡过程中起着重要的信号传递作用，是肿瘤免疫逃避机制中重要的因子，并参与恶性肿瘤的演变过程［1,2］。
sFas是经过交替剪切的Fas mRNA突变体所编码翻译的缺乏跨膜编码序列功能区的蛋白质。这种突变是由于Fas基因内含子7外显子8区的插入缺失所致，发生这种突变后影响到凋亡反应，即sFas能够阻止FasL与膜受体Fas的结合，使肿瘤细胞逃避机体通过Fas系统途径的免疫清除机制，成为恶性肿瘤产生、存活及进展的重要潜在生物学原因［3］。sFasL则是跨膜型FasL被间质金属蛋白酶切割后、其膜外段脱落形成的，分子量为26KD，存在于细胞周围环境中［4］。sFasL具备FasL的生物学活性，也能够与Fas结合并向表达Fas的淋巴细胞传导凋亡信号。但sFasL诱导细胞凋亡的能力较FasL弱，因此sFasL被认为能够阻碍FasL与Fas结合、从而使靶细胞逃避Fas系统介导的细胞凋亡［4］。
一些研究结果显示多种病人的血清中sFas和sFasL水平升高，证实两者在恶性肿瘤免疫逃避中的重要作用［5?7］。Mizutani等［8,9］研究也发现膀胱癌病人血清sFas和sFasL水平均显著升高，而且水平低者预后明显好于水平高者；两者水平与外周血淋巴细胞抗肿瘤细胞活性负相关，上述结果表明了高水平的sFas和sFasL能够使肿瘤细胞逃避机体免疫监视及Fas细胞凋亡系统的清除。但目前有关膀胱癌病人尿sFas和sFasL水平及意义的研究尚未见报道。
本组结果显示膀胱癌病人尿sFas水平显著升高，肿瘤切除术后显著降低，提示尿sFas水平与肿瘤负荷有关，至于sFas是来源于肿瘤细胞本身或/和肿瘤浸润细胞尚存争议［5,8］。本组结果显示术前及术后的sFas水平均与肿瘤临床分期和病理分级密切正相关，提示尿sFas水平可以反映膀胱癌的浸润深度和恶性程度。虽然膀胱癌复发者与无复发者术前尿sFas水平差异无显著性，但术后复发者的sFas水平下降幅度显著低于无复发者，而且发现复发时间间隔越短、sFas水平越高，这在一定程度上解释了肿瘤复发与逃避机体免疫监视有关，同时检测术后尿sFas水平有助于评价病人预后并制定合适的随访、治疗方案。
本组对膀胱癌病人尿sFasL水平进行检测，发现其sFasL水平显著高于正常健康人，术后sFasL水平下降，而且sFasL水平与肿瘤临床分期呈正相关，但与肿瘤分级及复发之间相关无显著性差异，提示sFasL参与膀胱癌发病过程，其水平反映肿瘤负荷情况，也是预示肿瘤浸润深度的标记物。至于尿中sFasL是否来源于肿瘤细胞还是浸润淋巴细胞，有待于今后深入研究。
本组结果显示膀胱癌病人尿sFas和sFasL水平均与病人年龄、性别、肿瘤大小及数目无关，这与血清中两者表达水平的研究相一致［8,9］。虽然膀胱癌组织中Fas与FasL表达之间、血清中sFas与sFasL表达水平之间均存在相关性［8,10］，但本组膀胱癌病人术前及术后尿中sFas与sFasL表达水平之间均无显著相关性，而且术前与术后sFas/sFasL比率差别无显著性意义，提示两者分泌调控乃至作用机制的复杂性，还有待于进一步阐明。
综上所述，尿sFas和sFasL有可能成为膀胱癌一种新的肿瘤标记，通过抑制sFas和/或sFasL的形成，将提高肿瘤细胞对Fas介导的细胞凋亡的易感性和细胞毒淋巴细胞的杀伤活性，从而成为膀胱癌治疗新的靶点。
【参考文献】
［1］ Nagata S.Fas and Fas ligand:a death factor and its receptor［J］.Adv Immunol,1994,57（1）:129?144.
［2］ Cheng J,Zhou T,Liu C,et al. Protection from Fas?mediated apoptosis by a soluble form of the Fas molecule［J］.Science,1994,263（5154）:1759?1762.
［3］ Kayagaki N,Kawasaki A,Ebata T,et al. Metalloprotease?mediated release of human Fas ligand［J］.J Exp Med,1995,182(6):1777?1783.
［4］ Suda T,Hashimoto H,Tanaka M,et al. Membrane Fas ligand kills human peripheral blood lymphocytes,and soluble Fas ligand blocks the killing［J］.J Exp Med,1997,186（12）:2045?2450.
［5］ Nonomura N,Nishimura K,Ono Y,et al. Soluble Fas in serum from patients with renal cell carcinoma［J］.Urology,2000,155（1）:151?155.
［6］ Hasegawa D,Kojima S,Tatsumi E,et al. Elevation of the serum Fas ligand in patients with hemophagocytic syndrome and Diamond?blackfan anemia［J］.Blood,1998,91（8）：2793?2799.
［7］ Bellone G,Smirne C,Carbone A,et al. Production and pro?apoptotic activity of soluble CD95 ligand in pancreatic carcinoma［J］.Clin Cancer Res,2000,6（6）:2448?2455.
［8］ Mizutani Y,Yoshida O,Bonavida B. Prognostic significance of soluble Fas in the serum of patients with bladder cancer［J］.J Urology,1998,160（2）:571?576.
［9］ Mizutani Y,Hongo F,Sato N,et al. Significance of serum soluble Fas ligand in patients with bladder carcinoma［J］.Cancer,2001,92（1）:287?293.
［10］谢庆祥,汪鸿,缪友仁,等.72例膀胱移行细胞癌中Fas和FasL的表达［J］.,2000,19（2）:156?158.