膀胱癌患者血清内皮生长因子水平检测及临床意义
【摘要】 目的：检测膀胱癌患者血清血管内皮生长因子(VEGF)的水平变化，探讨其与肿瘤的分级、分期的关系。方法：采用ELISA法检测48 例膀胱癌患者，20 例前列腺增生症患者和30 例正常对照组血清VEGF水平。结果：膀胱癌患者血清VEGF的水平明显高于前列腺增生症组和诊断对照组。膀胱癌患者VEGF的水平与肿瘤的分级、分期有关，其中局部浸润性癌显著高于浅表性癌(P＜0.01)；远处转移组显著高于局部浸润组(P＜0.01)。G3级患者VEGF水平均显著高于G1级和G2级(P＜0.01)。结论：膀胱癌患者血清中VEGF水平显著升高，并与肿瘤的分级、分期及远处转移有关。
【关键词】 膀胱肿瘤 血管内皮生长因子 检测 临床意义
恶性肿瘤最重要的特点是侵袭性生长和远处转移，此过程与肿瘤新生血管的大量形成及基质、血管基底膜的降解有密切关系。血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异促进血管内皮细胞增殖的细胞因子，在促进血管生成上发挥重要作用［1，2］。研究发现VEGF的高表达与肿瘤的生长、转移关系密切。本研究通过检测VEGF在膀胱癌患者血清中的水平，探讨VEGF与膀胱癌恶性程度的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 病理证实为膀胱移行细胞癌患者48 例，其中男28 例，女20 例，年龄52 岁～73 岁。根据肿瘤浸润程度分为浅表性癌组(Tis～T1)16 例，浸润性癌组(T2～T4)32 例，其中局部浸润(T24 a)27 例，远处转移(T4b)5 例。病理分级采用WHO标准，G1级16 例，G2级20 例，G3级12 例。20 例良性前列腺增生患者年龄为55 岁～77 岁(前列腺增生组)。正常对照组30 例均为健康体检者，其中男16 例，女14 例，年龄35 岁～65 岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有患者于入院后治疗前空腹抽取静脉血；健康体检者也于空腹时抽取静脉血2 mL，用EDTA抗凝，3000r/min离心10 min，分离血清存放于－20℃待用。
1.2.2 测定方法 VEGF试剂盒购于晶美生物工程有限公司，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。步骤：鼠抗人VEGF单克隆抗体包被96孔聚丙乙烯酶标板后，每孔加入100 μL样本稀释液，再分别加标准品和待测血清100 μL，标准品VEGF165浓度分别为2000 μL、1000 μL、500 μL、250 μL、125 μL、62.5 μL、31.25 μL/L，以稀释液作空白对照，所有标本均设双孔检测。加样后置室温2 h，洗3次，甩干，除空白孔外，每孔加人生物素化抗体100 μL，置室温1 h，洗涤3次，甩干，加入辣根过氧化氢酶标记的抗人VEGF多克隆抗体100 μL，置室温300 min，洗涤3次，甩干，加入底物50 μL，避光室温显色15 min，加入2mol/L的硫酸50 μL终止反应，立即用酶标仪450nm波长测定各孔光密度值，以VEGF标准品浓度为横坐标，相应的光密度为纵坐标作图，根据待测标本的光密度值在直线上查出相应的VEGF含量。
1.3 统计学分析 各组数据均以lusm表示，差异显著性采用t检验和方差分析。
2 结 果
2.1 各组血清VEGF水平测定结果(见表Ⅰ) 表Ⅰ 各组血清VEGF水平
2.2 血清VEGF水平与膀胱癌分期的关系(见表Ⅱ)表Ⅱ 血清VEGF水平与膀胱癌分期的关系
2.3 血清VEGF水平与膀胱癌分级的关系(见表Ⅲ)Ⅲ 血清VEGF水平与膀胱癌分级的关系
3 讨 论
膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其特点是多中心、易复发及浸润性生长。新生血管形成是肿瘤生长的基础，同时又是恶性肿瘤转移的重要途径。在肿瘤生长过程中，当瘤体直径达到1 mm～2 mm后，要继续发展或转移，必须要有足够的营养供应，这就要求形成供应肿瘤的新生血管，新生血管一旦生成，肿瘤细胞就迅速出现侵袭和转移。然而，肿瘤血管的生成，受促进因子和抑制因子的调节。VEGF是一个同源二聚体糖蛋白，其mRNA有5种异构体，氨基酸长度分别为121，145，165，189，206，其中VEGF165为体内主要存在方式。VEGF的受体为FLK1/KDR，FLT1，FLT4，VEGF通过与受体结合而发挥作用［3］。增强血管的通透性是VEGF的生物学功能，其作用是组胺的50 000倍，是目前已知作用最强的促进血管内皮生长的细胞因子。VEGF可直接刺激内皮细胞分裂增殖，最直接参与诱导肿瘤血管生成［4］。丰富的血管不仅增加了肿瘤细胞进入血循环的机会，而且还可以侵入邻近与毛细血管伴行的淋巴管。许多肿瘤细胞可分泌VEGF，VEGF可诱导肿瘤血管形成，增加血管通透性，协助肿瘤细胞进入脉管系统，促进肿瘤侵袭转移［5］。研究发现，VEGF在乳腺癌及中是一种有价值的预后因素［6］。Edgren等［7］报道VEGF在肾癌患者的水平最高。Orimerien等［8］采用核糖核酸酶保护分析法对45 例膀胱癌和8 例正常膀胱组织检测中，发现膀胱癌组织VEGF的表达是正常组织的3倍。Miyake等［9］通过对51 例正常人和135 例膀胱癌患者的研究发现，膀胱癌患者血液中的VEGF的水平明显高于正常人的水平，但是，在浅表性患者和浸润性患者之间，却没有明显的差异。
本研究发现膀胱癌患者术前血清中VEGF的水平均显著高于前列腺增生组和对照组，提示在膀胱癌进展过程中，VEGF有促进肿瘤血管的形成及肿瘤细胞的浸润和转移。肿瘤进展过程中肿瘤组织可分泌多种因子和多种蛋白水解酶类，特别是VEGF转移到内皮细胞和血管基底膜表面，以促进内皮细胞分裂，增加毛细血管的通透性，利于内皮细胞的增殖和迁移，促进肿瘤新生血管的形成。同时VEGF还能促进内皮细胞和恶性肿瘤细胞表达整合素，以利于肿瘤细胞的迁移、黏附和浸润［10］。本研究结果还显示，血清VEGF水平的增高程度与肿瘤的分期、病理分级有密切关系：在浸润性膀胱癌患者血清中VEGF水平显著高于浅表性膀胱癌患者的水平；高分级(G3级)患者血清VEGF水平显著高于低分级(G1级和G2级)患者的水平，而G1级和G2级之间无显著差异，提示检测膀胱癌患者术前血清中VEGF水平对判断膀胱癌恶性程度有参考价值，有望成为筛选中晚期膀胱癌患者的方法之一。
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